接上期，30年前的無血清培養(yǎng)基里都含啥

三、無血清培養(yǎng)基1979年神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)了一個(gè)重要進(jìn)展，用化學(xué)添加劑即可維持神經(jīng)細(xì)胞存活與生長(zhǎng)而不需要在培養(yǎng)基中添加血清。其工作基礎(chǔ)是用合適的激素、營(yíng)養(yǎng)物和促貼壁的物質(zhì)的組合置換培養(yǎng)基中的成分，后找到了適合大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)的試劑配方，該配方稱為N2，專門用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，早是用在B104大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的培養(yǎng)。它的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是1：1的DMEM與H12的混合液，添加了胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、腐胺和硒。胰島素和胰島素樣生長(zhǎng)因子對(duì)于大多數(shù)類型細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)有重要作用，硒是谷胱甘肽...

查看更多

深度挖墳，細(xì)胞培養(yǎng)體系的那些老知識(shí)

一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`sMEM的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`sF12也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規(guī)含有無機(jī)鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12這兩種培養(yǎng)基各取1/2，形成神經(jīng)生物學(xué)通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM，現(xiàn)應(yīng)用于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞，同MEM含有相同的營(yíng)養(yǎng)成分，但濃度高...

查看更多

iPS 優(yōu)化建系方法和安全性

早期建立iPS細(xì)胞的方法為：利用逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)表達(dá)4個(gè)Yamanaka因子,然后將細(xì)胞在ES細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng),再用抗性基因篩選多潛能性相關(guān)啟動(dòng)子的激活，如Oct4和Nanog啟動(dòng)子，在得到細(xì)胞形態(tài)相似的iPS細(xì)胞后，鑒定iPS細(xì)胞的多潛能性。這些方法構(gòu)建iPS細(xì)胞的效率很低,細(xì)胞多潛能性不均一,而且有內(nèi)在安全問題,如病毒的插入突變c-Myc的致癌性,使其仍無法應(yīng)用于臨床治療。為解決這些安全問題和提高iPS細(xì)胞建系的效率,人們從多方面改進(jìn)構(gòu)建iPS細(xì)胞。1.轉(zhuǎn)座子技術(shù)英國(guó)和加拿...

查看更多

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況及應(yīng)注意的小細(xì)節(jié)

污染是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中面臨的主要問題，某些污染的發(fā)生往往難以察覺及檢測(cè)，而且污染源能長(zhǎng)期共存于培養(yǎng)體系中。常見污染情況有：1.細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力是否足夠，尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象?？稍谂囵B(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理2.霉菌：培養(yǎng)液是...

查看更多

物生樣本常用冷凍儲(chǔ)存技術(shù)

儲(chǔ)存溫度生物樣本的長(zhǎng)期儲(chǔ)存通常使用盡可能低的溫度來降低樣本內(nèi)的生化反應(yīng)提高樣本內(nèi)各種成分的穩(wěn)定性。生物大分子、細(xì)胞、組織和器官的常用儲(chǔ)存溫度有-80℃(超低溫冰箱),-140℃(液氮?dú)庀嗷蛏罾浔?以及-196℃(液氮液相)，溫度越低樣本的穩(wěn)定保存時(shí)間越長(zhǎng)。0～-60℃是水的結(jié)晶溫度，容易對(duì)細(xì)胞和組織的微觀結(jié)構(gòu)造成傷害，一般不使用這一溫度來保存組織和細(xì)胞。部分經(jīng)過提純的生物大分子可以在0～-60℃穩(wěn)定保存一定時(shí)間，但在組織樣本內(nèi)生物大分子受到細(xì)胞組織內(nèi)多種因素的影響，穩(wěn)定性有...

查看更多