實用哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)手冊（上）

細(xì)胞培養(yǎng)基本概念細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)環(huán)境下，使其生長繁殖，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)物可以是單個細(xì)胞，也可以是細(xì)胞群。細(xì)胞培養(yǎng)目的與用途1、科學(xué)研究：藥物研究開發(fā)與基礎(chǔ)研究藥物研究與開發(fā)(1)新藥篩選：如化學(xué)合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。(2)疫苗研究與開發(fā)：如病毒性疫苗的研究與開發(fā)（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。(3)基因工程藥物研究與開發(fā)：如干擾素研究與開發(fā)，細(xì)胞生長因子研究與開發(fā)等。(4...

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原代細(xì)胞培養(yǎng)中常遇到的誤區(qū)

原代細(xì)胞培養(yǎng)中常遇到的誤區(qū)原代細(xì)胞（primaryculturecell）是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。原代細(xì)胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用，市場前景廣闊。原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器...

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原代細(xì)胞鑒定技術(shù)

一、形態(tài)學(xué)鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征2.細(xì)胞染色檢查：a)將無菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加細(xì)胞懸液后培養(yǎng)；b)待細(xì)胞長滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c)用PBS/甲醇（1:1）固定15分鐘；d)棄固定液，加合適的染色液染色；e)染色完畢后用清水洗凈，置于空氣中干燥，f)干燥后，用二甲苯透明，光學(xué)樹脂封片后觀察。二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片；2.PBS清洗標(biāo)本3...

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原代細(xì)胞傳代技術(shù)

一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。二、懸浮細(xì)胞的傳代1、直接傳代①讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。②用...

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細(xì)胞凍存技術(shù)介紹

細(xì)胞凍存技術(shù)實驗室低溫保存設(shè)備包括：液氮保存箱、液氮罐、-140℃/-150℃深冷低溫保存箱、-86℃超低溫冰箱、程控降溫儀、低溫冰箱（-20℃、-30℃、-40℃）、藥品保存箱、疫苗保存箱、血庫冰箱、層析柜、防爆冰箱、防火冰箱等。檢驗冰箱可靠性和制冷能力的方法：1、常規(guī)冰箱放置溫度計；2、超低溫冰箱放置加熱器、大量樣品或反復(fù)開門1.凍存保護(hù)劑很多化合物都可以作為凍存保護(hù)劑，它們既可以單獨使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準(zhǔn)則，但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜...

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